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| 差示分光光度法测定药物制剂中的四环素 |
| 来源：中国仪器仪表大市场信息中心 时间：2008/7/24 浏览数：1733 【我要关闭】 |
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四环素是生物合成的广谱抗菌素。临床研究表明，病人服用四环素后，定时测定体液中四环素含量可诊断胃癌，四环素还可作为荧光探针用以诊断癌症。近年来，四环素还广泛被用作饲料添加剂，以增强动物的抗病能力。关于四环素的测定方法，已有许多报道，如微生物法、分光光度法差示导数光谱法、FIA、RHPL、ISE、吸附SV、三氯化铁比色法等。本文利用四环素与钻离子在PH为11.5的Na2HPO4－NaOH缓冲溶液中生成黄绿色络合物，并根据其光谱变化的牲性，采用差示光度法不经分离直接测定了药物制剂中的四环素。四环素浓度在0.80－25ug/ml范围内符合比耳定律。
1 实验部分
1.1仪器与试剂
TU－1221型紫外－可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；KL－013数字酸度计（科立龙电子有限公司）；XYJ80－2离心沉淀机（江苏医疗器械厂）。
盐酸四环素标准液：用标准品（中国药品生物制品检定所提供）配成2mg／ml的储备液，使用时用水稀释成0.2mg／ml；钻离子溶液：用CoCl2·6H2O配成1mg／ml的储备液，使用时稀释成0.1mg／ml；Na2HPO4－NaOH缓冲溶液。以上试剂均为分析纯，水为市售二次去离子水。
1.2 实验方法
于两支25ml的比色管中，分别加入0.2mg／ml的盐酸四环素标准使用液2.0ml，一支用水稀释至刻度作参比液，另一支加入0.1mg／ml的钴离子溶液2ml，Na2HPO4－NaOH缓冲2ml，用水稀释至刻度。前者置参比池中，后者置样品池中，于405nm处测其吸光度。
2 结果与讨论
2.1 实验条件的选择
络合物的形成受诸多因素的影响，本文对酸度，缓冲溶液的种类及用量、钴离子的用量、反应温度、反应时间等条件的影响作了讨论。
2.1.1 吸收光谱 将盐酸四环素标准使用液按实验方法处理后，在380－500nm波长范围内进行波长扫描。盐酸四环素在405nm处最大吸收，可作为测定波长。
2.1.2 酸度对络合物形成的影响 溶液的酸度对四环素与钴离子生成络合物影响较大。对不同酸度条件下络合物的形成进行了研究，在酸性、中性介质中，络合物不易形成。随着溶液PH值的升高，溶液颜色逐渐加深，吸光度逐渐增大。PH在10.5－13.0范围内吸光度最大且稳定；当PH>13.0，络合物的吸光度开始减小，这说明络合物在强碱性介质中开始离解，PH值越大，离解越历害。这是由于大量的OH－和钴离子形成了Co(OH)的络离子，促使四环素一钴离子络合物离解。故本实验选择pH11.5。》
2.1.3 缓冲溶液种类及用量
缓冲溶液的种类及用量对络合物的形成有一定的影响。在Na2HPO4－NaOH，H3PO4－柠檬酸－NaOH，NaOH等不同的缓冲体系中，以在Na2HPO4－NaOH缓冲液中络合物的吸光度最大且稳定，用量以控制在2ml最为合适，用量太小不利于络合物的形成，太大形成的络合物又开始离解。在H3PO4－柠檬酸－NaOH缓冲液中，由于柠檬酸对Co2+有较强的络合能力，消弱了Co2+与四环素的络合。故本实验选择Na2HPO4－NaOH作为缓冲溶液。
2.1.4 钴离子用量的影响 在Na2HPO4－NaOH缓冲液中，足够量的Co2+对对络合物的形成是必要的，随钴离子用量的增加，络合物的吸光度了相就增加。钴离子用量在1.5－3.0ml范围内，吸光度值最大且稳定。故本验选择钴离子的用量为2ml。
2.1.5 温度及时间对形成络合物的影响 温度升高，吸光度略有减小，同时，随温度升高，络合物的最大吸收波长会发生红移，故本研究选择在室温（20℃）下进行。另外，实验还表明，络合物的形成速度比较快，按实验方法加入试剂后（约需10min），立刻进行时间扫描，发现1h内络合物的吸光度值的变化仅为0.005，24h内吸光度值无显著变化，说明生成的络合物很稳定。
2.1.6 线性范围 在12支25ml的比色管中，依次加入 0.1、0.5、1.0、1.5、2.0，2.5ml盐酸四环素标准工作液各两份，其余按实验方法处理后测定，所得结果线性处理后，线性回归方程为：A＝－0.0095＋0.0305c（c为四环素的浓度：ug／ml），相关系数r＝0.9997，
ε＝1.33×104L·mol－1·cm－1。
根据IUPAC规定，计算得检出限为0.40ug／ml，结果表明四环素浓度在0.80－
25ug／ml范围内符合比耳定律。
2.2 干扰性实验
四环素制剂中加有淀粉、滑石粉、糊精、葡萄糖、硬脂酸镁等赋形剂。按实验方法作同样处理，所有赋形剂的差示光谱在测定波长处无吸收。因此，可以不用任何分离直接测定片剂中四环素的含量。
2.3 回收率测定
精密称取适量已知含量的样品，加入一定量的盐酸四环素标准品，按实验方法处理，用测得的吸光度值减去样品的吸光度，用线性回归方程计算，结果见表1。
表 1 回收率实验结果
加入量 检测量 RSD 回收率
（mg） (mg) (n=4)(%) (%)
4.25 4.23 0.46 99.5
4.25 4.31 0.85 101.5
3.75 3.65 1.34 97.8
3.75 3.70 0.72 98.7
3 样品的测定
精密称取四环素片10片，分别研成粉末，再适量称取，按前述实验方法处理测定，用回归方程计算其含量，结果见表2。本法较紫外法结果略偏低，经t检验，本法与紫外法间并无系统误差。
表2 样品中四环素的测定
本法测得值RSD（n＝4 标示量 紫外法测得
样品 （mg／片） （％） （mg／片） 值（mg／片）
1 0.2297 0.47 0.25 0.2308
2 0.2255 1.01 0.25 0.2278
3 0.2455 0.61 0.25 0.2480
4 0.2248 0.75 0.25 0.2265
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